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抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2培养步骤

2024/4/9 20:35:04发布15次查看
抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1f4e6a2培养步骤:
1)复苏细胞:将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6ml*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%trypsin-0.53mm edta)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,*脱落后吸出,在1000rpm条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2ml培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000rpm条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法三:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
1)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰mei,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000rpm条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入到冻存液中。
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